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本试剂盒应用于胚胎干细胞(ES)和诱导多功能干细胞(iPS)的鉴定，以及免疫组化、免疫印迹等实验中的碱性磷酸酶显色。试剂盒内的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/硝基四氮唑蓝(NBT)是碱性磷酸酶(AP)的常用底物之一，BCIP在AP的催化下会被水解生成强反应性产物，后者与硝基四氮唑蓝(NBT)反应生成不溶性产物，使之呈现深蓝色至蓝紫色。

• BCIP和NBT对人体有刺激性，请注意适当防护。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• AP显色工作液的配制：
  取20μL 150×NBT溶液加入到3mL碱性磷酸酶显色反应缓冲液，充分混合均匀，再加入30μL 100×BCIP
  溶液，配置成工作液，如需改变工作液体积，可按相同比例适量配制。1h内使用。
  
• 显色步骤：
  
  • 检测细胞的内源性碱性磷酸酶：吸出培养基，PBS润洗3次，加入4％多聚甲醛固定1～2min。吸出固定液，使用TBST清洗三次，加入显色工作液，室温避光孵育5～30分钟，如孵育30min时没有显色，孵育时间可延长至24h，持续观察直至显色至预期深浅后，用PBS润洗1次，然后保存于PBS溶液中，显微镜下观察结果。
    
  • 检测组织切片或膜上结合的碱性磷酸酶抗体：使用洗涤液洗涤完后，加入适量工作液，保证完全覆盖样品表面，室温避光孵育5～30分钟，如孵育30min时没有显色，孵育时间可延长至24h，持续观察直至显色至预期深浅后，去除工作液，用蒸馏水清洗1～2次终止显色反应。